Affinity Prestained Protein Ladder (10-180 kDa) with 45kDa 使用说明书

友情提醒：每次吸取都要新换灭过菌的枪头（或干净的针头），用完马上盖盖，避免引入蛋白酶污染导致降解！

【储存条件】 -20˚C恒温长期保存，4˚C保存6个月，建议分装保存，避免反复冻融。

【产品简介】

本产品由跨度从10~180 kDa的10种纯化的天然蛋白混合而成，各条带浓度约为0.2~0.4 mg/ml。其中75 kDa条带为红色预染条带，25kDa条带为绿色预染条带，方便判断各个条带的准确位置。本产品适合作为SDS-PAGE电泳时，变性蛋白样品的分子量参照，并可实时观察蛋白样品的电泳分离状况，也可用于检测Western blot的转膜效率。由于共价结合的染料会影响蛋白质分子的电泳迁移率，本产品适于粗略地估计目的蛋白样品的分子量。

【使用方法】

1. 将本产品于室温融化后，轻柔混匀，使沉淀充分溶解（切勿煮沸加热）；

2. 按吸取3~5 μl加入SDS-聚丙烯酰胺胶的上样孔中，与待测样品一起电泳和转膜；

3. 电泳结束后用蛋白染色液染色观察目的条带。

【注意事项】

1. 使用时应该将从冰箱中取出的产品恢复至室温后使用，否则可能由于低温下蛋白变性不彻底导致电泳条带出现不同程度的弥散；

2. 使用前先将产品恢复至室温后混匀，使沉淀充分溶解，否则可能导致电泳条带出现不同程度的弥散或拖带；

3. 本产品含有 SDS，蛋白已变性，不宜作为天然蛋白分子电泳时的分子量参照标准。

【图列展示】

（单一浓度PAGE胶，Tris-Glycine电泳缓冲液，实际电泳图）

 新版本蛋白marker，加强了条带亮度，也增强了抗洗膜能力

 （梯度胶和单一浓度胶，Tris-Glycine电泳缓冲液，带型示意图）

【附录：转膜和洗膜】

A、转膜条件（冰上进行）：

a. Transfer with buffer containing 20% methanol to fix proteins on membrane.

b.  Wash membrane with PBS or TBS containing less than 0.1% Tween-20 at 4°C.

B、洗膜条件（4度进行）：

Membrane: Nitrocellulose membranes / PVDF

Wash Buffer:1X Tris buffered saline, 0.1% Tween-20 (TBST)（吐温20不能超过0.1%）

C、Stripping Buffer: 15g Glycine, 1g SDS, 10 ml Tween20, pH2.2–Adjust volume to 1L

如果需要用到含有DTT /b-ME 的Stripping buffer，膜需要先以 1X Tris buffered saline(TBS)  洗三次，把 Tween-20去干净后，再进行Stripping。

1X Tris buffered saline:  6.05 g Tris and 8.76 g NaCl in 800 mL of H₂O. Adjust pH to 7.5 with 1 M HCl and make volume up to 1 L with H₂O

【备注】

本产品仅供科研使用。